考慮實驗目的和應用場景不同的實驗目的和應用場景可能需要不同類型的轉染試劑。***應用：如果轉染試劑用于基因***或藥物研發等應用，那么需要選擇具有良好生物相容性和**性的試劑。在**有效的遞送mRNA使用改性PEI基脂質聚合物的研究中，探索了All-Fect和Leu-FectC作為新型轉染試劑，這些試劑具有優異的生物相容性、高效的遞送能力和強大的溶酶體逃逸能力，可直接增加mRNA穩定性并促進高效基因翻譯，適用于基因***等應用4。基礎研究：對于基礎研究實驗，可能更注重轉染效率和實驗的可重復性。在不同轉染方式用于modRNA轉染人脂肪干細胞的初步研究中，比較了不同轉染方式的轉染效率和蛋白表達情況，以及在體內促進血管再生的效果，為基礎研究提供了參考10。綜上所述，選擇**適合的RNA轉染試劑需要綜合考慮轉染效率、細胞毒性、RNA需求、血清兼容性、多因子轉染能力以及實驗目的和應用場景等多個因素。在選擇轉染試劑時，可以參考已有的研究文獻，進行預實驗以評估不同試劑的性能，并根據實驗需求和條件選擇**合適的轉染試劑。在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。山東轉染試劑

網格蛋白介導的內吞途徑呼吸道合胞病毒（RSV）是導致嬰幼兒***的主要病毒病原體。研究表明，網格蛋白介導型內吞途徑是目前研究得較為透徹且經典的病毒入胞途徑。其中網格蛋白在此途徑中的地位很重要。通過針對網格蛋白重鏈的小干擾RNA（siRNA）抑制網格蛋白的表達，可以有效的抑制RSV***Hela細胞。這提示網格蛋白介導的內吞途徑在病毒感染細胞過程中發揮重要作用，同時也暗示了在某些情況下，RNA轉染試劑可能利用這一途徑進入細胞21。二、小窩蛋白介導的內吞途徑在研究非病毒載體用于小干擾RNA（siRNA）遞送時發現，將用組氨酸和半胱氨酸修飾的HIV-1Tat肽（mTat）與聚乙烯亞胺（PEI）結合，并與陽離子兩親脂質基試劑INTERFERin（INT）組合成的雜合載體（mTat/PEI/INT）能高效遞送siRNA。研究表明，FilipinIII和β-環糊精（小窩蛋白介導的內吞作用抑制劑）能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉染，而氯丙嗪（網格蛋白介導的內吞作用抑制劑）則不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉染。此外，mTat/PEI/INT在4°C時的轉染效率明顯低于37°C。這些結果表明，mTat/PEI/INT作為一種潛在的有吸引力的非病毒載體用于siRNA遞送，其轉染過程可能是通過小窩蛋白介導且依賴溫度的內吞途徑實現的。中國臺灣脾轉染試劑納米顆粒，由于其在DNA轉運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉基因的非病毒載體。

在人類多能干細胞衍生的心肌細胞（HPSC-CMs）中的應用低轉染效率是實現HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復研究中廣泛應用的障礙。通過優化四個基本參數，即血清補充劑、復制和轉染之間的時間、試劑與DNA比以及細胞密度，使用Promega的Viafect?轉染試劑能夠將HPSC-CMs轉染至約95%的效率28。盡管活力有所降低，但轉染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結構完整性，確保了至少14天的轉染基因持續表達，為心臟相關疾病的研究開辟了新機遇。在C2C12細胞中的應用C2C12細胞在肌肉領域***使用，但它們和原代成肌細胞一樣難以轉染，影響了下游實驗。雖然自2015年以來超過95%的使用C2C12細胞的報告使用了一種金標準轉染劑（如Lipofectamine®），但有研究表明其效率低于30%。通過比較五種商業試劑（Lipofectamine®3000、Viafect?、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®）在C2C12細胞中的轉染效率，發現通過優化DNA:轉染劑比例和細胞密度，所有試劑都能達到超過60%的轉染效率，且對細胞生長和活力影響有限。這些試劑還能在C2C12細胞中轉染后高效生成GFP陽性的肌管，但在轉染siRNA和對原代肌肉細胞的轉染中表現出較低效率和較高毒性3。

    在鯉上皮瘤細胞中的應用在鯉上皮瘤細胞進行基因功能研究時，轉染試劑和DNA的劑量以及取樣時間缺乏統一的數據支持。選取兩種常用轉染試劑Lipofectamine®2000和FuGENE®HD進行多配組轉染試驗，在28℃，以35mm培養皿鋪板，16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在轉染后48h達到比較高轉染效率(±)%；12μLFuGENE®HD和4μgDNA在轉染72h后轉染效率達到(±)%。通過構建鯉高不飽和脂肪酸合成相關轉錄因子過氧化物酶體增殖物***受體蛋白α（PPARα）的EGFP標簽載體進行驗證，兩種轉染試劑分別獲得了約4%和約8%的轉染效率，并對下游脂肪酸去飽和酶2（fads2）基因的轉錄調控效應進行檢測，結果為后續利用鯉上皮瘤細胞進行基因功能研究提供了數據支持5。在巨噬細胞中的應用商業轉染試劑Lipofectamine已***用于核酸的細胞質遞送和與細胞內先天免疫傳感器進行細胞源嚙合，以觸發I型干擾素（IFN）生產。然而，單獨對IIFN響應的脂質切積胺的影響尚未詳細研究。研究表明，Lipofectamine誘導在原始，I型IFN誘導依賴于干擾素調節因子（IRF）3和IRF7，并且部分需要達洛/白細胞介素-1受體-含有結構域的適配器誘導的干擾素-β。相比之下，轉染試劑XFECT未***IIFN信令6。 脂質顆粒的加入導致內體DNA釋放增加。

優化電轉方法篩選**適電壓和脈沖時間：不同細胞種類電轉所需的**適電壓和脈沖時間不同。例如，人成纖維細胞電轉modRNA的**適電壓為440V，**適脈沖時間為30ms；Hela、293T、3T3細胞電轉**適電壓分別為425V、400V、440V，**適脈沖時間均為30ms；人/兔外周血來源的懸浮的單個核細胞的**適電壓分別為840V和860V，**適脈沖時間均為20ms。通過篩選**適電壓和脈沖時間，可以提高RNA轉染效率，同時證明了電轉法轉染modRNA進入細胞的可行性，且可同時將兩種modRNA導入同一個細胞內6。RNA電穿孔高效轉染原代淋巴細胞：使用體外轉錄的mRNA通過電穿孔可以實現高基因轉染效率和低轉染相關毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。轉染時推薦使用血清減少或無血清培養基包括陽離子轉染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。上海轉染試劑代做

deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。山東轉染試劑

準確控制脂質體與核酸的比例是關鍵。通過實驗確定比較好的脂質體 - 核酸復合物比例，一般可以進行梯度實驗，從較低比例開始逐步增加，觀察轉染效率的變化。例如，不同類型的細胞對脂質體和 RNA 或 DNA 的比例要求不同，像在轉染 HEK293 細胞時，可能 1:3（脂質體：核酸）的比例比較合適，而對于較難轉染的原代細胞，可能需要適當增加脂質體的用量。

不同配方的脂質體在轉染效率上有差異。根據細胞類型和實驗目的選擇合適的脂質體試劑。例如，一些脂質體含有特殊的功能成分，如靶向基團可以增強與特定細胞的結合，或者具有促進內吞體逃逸的成分，從而提高轉染效率。新型的脂質體制劑不斷涌現，如含有可電離陽離子脂質的脂質體，在生理 pH 條件下呈電中性，減少與血清蛋白的相互作用，進入酸性的內體后帶正電，更有利于與內體膜融合，釋放核酸，在提高轉染效率的同時降低細胞毒性。 山東轉染試劑