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德國雙分子層膜片鉗系統 歡迎咨詢 因斯蔻浦供應

2025-02-21 01:02:21

全細胞膜片鉗記錄(Whole-cellpatch-clamprecording)是一種早期且使用頻繁的鉗夾技術,相當于連續單電極電壓鉗夾記錄,也就是說,全細胞記錄類似于傳統的細胞內記錄,但具有更大的優勢,如分辨率高、噪聲低、穩定性好、細胞內成分可控等。全細胞記錄技術測量一個細胞內所有通道的電流,記錄過程中電極的溶液代替原生質的成分。雖然膜片鉗記錄技術相對于原來的單電極電壓鉗有了很大的進步,尤其是在單離子通道鉗記錄中,細胞或腦片的組織選擇和實驗溶液的制備仍然是非常重要的步驟。封接(seal)是膜片鉗記錄的關鍵步驟之一。德國雙分子層膜片鉗系統

電壓鉗的缺點∶電壓鉗技術目前主要用于巨火細胞的全細胞電流研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發揮其它技術不能替代的作用。但也有其致命的弱點1、微電極需刺破細胞膜進入細胞,以致造成細胞漿流失,破壞了細胞生理功能的完整性;2、不能測定單一通道電流。因為電壓鉗制的膜面積很大,包含著大量隨機開放和關閉著的通道,而且背景噪音大,往往掩蓋了單一通道的電流。3、對體積小的細胞(如哺乳類***元,直徑在10-30μm之間)進行電壓鉗實驗,技術上有更大的困難。由于電極需插入細胞,不得不將微電極的前列做得很細,如此細的前列致使電極阻抗很大,常常是60~-8OMΩ或120~150MΩ(取決于不同的充灌液)。這樣大的電極阻抗不利于作細胞內電流鉗或電壓鉗記錄時在短時間(μs)內向細胞內注入電流,達到鉗制膜電壓或膜電流之目的。再者,在小細胞上插入的兩根電極可產生電容而降低測量電壓電極的反應能力。美國雙分子層膜片鉗高阻抗封接細胞膜由脂類雙分子層和和蛋白質構成。

離子通道的近代觀念源于Hodgkin、Huxley、Katz等人在20世紀30—50年代的開創性研究。在1902年,Bernstein創造性地將Nernst的理論應用到生物膜上,提出了“膜學說”。他認為在靜息狀態下,細胞膜只對鉀離子具有通透性;而當細胞興奮的瞬間,膜的破裂使其喪失了選擇通透性,所有的離子都可以自由通過。Cole等人在1939年進行的高頻交變電流測量實驗表明,當動作電位被觸發時,雖然細胞的膜電導大為增加,但膜電容卻只略有下降,這個事實表明膜學說所宣稱的膜破裂的觀點是不可靠的。1949年Cole在玻璃微電極技術的基礎上發明了電壓鉗位(voltageclamptechnique)技術滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*59小時隨時人工在線咨詢.

一、記錄設備首先,盡可能完善膜片鉗記錄設備是實驗前的重要步驟,如用模型細胞測定電子設備、安裝并測試應用軟件、調節光學顯微鏡、檢驗防震工作臺等。二、微電極的制備膜片鉗電極是用外徑為1-2mm的毛細玻璃管拉制成的。標準的毛細玻璃管(外經1.5mm,管壁厚0.3mm)適合于制作單通道記錄的微電極,而全細胞記錄則應選管壁較薄(0.16mm)的毛細玻璃管,這樣可以使電極阻抗較低。三、封接(Sealing)技術封接(seal)是膜片鉗記錄的關鍵步驟之一。封接不好噪聲太大必然影響細胞膜電信號的記錄,一般要求封接阻抗至少20GΩ才可進行常規記錄。為了形成良好封接必須保持清潔的溶液、良好的視野以及適當的電極鍍膜。為了獲得較好的"千兆歐封接",細胞表面必須裸露以便微電極前列能接觸細胞,細胞的大小也是成功記錄的個因素,一般選擇10-20um的細胞比較理想。一些學者建立了組織切片膜片鉗技術(Slicepatch),就能在哺乳動物腦片制備上做全細胞記錄。

早在膜片鉗誕生之前,20世紀50~60年代,Hodgkin與Hexley便發現并使用了電壓鉗技術,他們通過雙電極電壓鉗在烏賊軸突上發現了動作電位的離子機制,并因此獲得了諾貝爾生理醫學獎。這也為后來膜片鉗的誕生奠定了基礎。于1976年,德國馬克斯普朗克生物物理化學研究所的Neher和Sakmann第1次于青蛙的肌細胞上,用玻璃電極吸下了一小片細胞膜,記錄導了皮安級的單通道離子電流,從而產生了膜片鉗技術。1980年,耶魯大學醫學院Sigworth等人在記錄電極內增加了負壓吸引,實現了10-100GΩ的高阻抗封接,使得單電極可以同時實現鉗制電位和記錄單通道電流。1991年,Neher與Sakmann因為對膜片鉗技術的突出貢獻獲得了諾貝爾生理醫學獎。膜片鉗技術,在人類對生理學的探究中,無異于一條道路,通往了名為細胞電生理的國度。膜片鉗技術也許某一天會被更便捷或更精確的技術取代,但其至今仍然是離子通道相關研究中使用蕞廣的技術。膜片鉗通常用于實驗室、制造業和電子工業等領域,用于夾持薄膜、塑料薄膜、金屬箔等材料。雙分子層膜片鉗廠家

膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來。德國雙分子層膜片鉗系統

膜片鉗技術是當前研究細胞膜電流及離子通道的蕞重要的技術。從技術層面來解釋的話,膜片鉗技術(patchclamp)是指利用鉗制電壓或者電流的方法(通常為鉗制電壓)來記錄細胞膜離子通道電活動的微電極技術。膜片鉗技術的原理為:使用一個一頭尖一頭粗的錐狀玻璃管,管中設有微電極,管的前列直徑約1.5~3.0μm,通過負壓吸引使前列口與細胞膜形成千兆歐姆級的阻抗封接,前列口內的細胞膜區域與周圍其他區域形成了電學分隔,然后人工鉗制此片區域細胞膜的電位,即可達到對膜片上離子通道電流的監測與記錄。德國雙分子層膜片鉗系統

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